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第一篇：乳制品中抗生素殘留現(xiàn)狀及其檢測方法的思

乳制品中抗生素殘留現(xiàn)狀及其檢測方法探究

來源：中國論文下載中心

[ 08-11-17 10:17:00 ]

作者：馮建成 張容鵠

編輯：cw2112549

摘 要：綜述了乳制品中抗生素殘留現(xiàn)狀和危害，以及各種抗生素殘留的檢測方法，為加強(qiáng)我國乳制品中的抗生素監(jiān)測，解決目前乳品工業(yè)發(fā)展中面臨的難題提供參考。 關(guān)鍵詞：乳制品；抗生素殘留；檢測方法

乳及乳制品是老少皆宜的營養(yǎng)品，在我國，乳制品及乳制品工業(yè)發(fā)展迅速，同時畜牧業(yè)也發(fā)展迅猛，β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等抗生素在乳畜飼養(yǎng)業(yè)中廣泛應(yīng)用，造成乳及乳制品中抗生素殘留，給消費(fèi)者健康帶來了潛在威脅，因而提高抗生素殘留的檢測技術(shù)顯得尤其重要，盡快開發(fā)或引進(jìn)先進(jìn)的抗生素檢測技術(shù)以解決我國當(dāng)前乳和乳制品行業(yè)面臨的難題已成為當(dāng)務(wù)之急。

 抗生素殘留現(xiàn)狀

我國乳制品中抗生素的殘留現(xiàn)狀不容樂觀，2006年的一份對北京、天津、石家莊5個零售點(diǎn)的77個牛奶樣品進(jìn)行β-內(nèi)酰胺酶的殘留檢測，63.6%的樣品檢測為陽性。一項(xiàng)對我國幾個大城市如西寧、南寧、廣州、杭州、泉州、北京等城市乳制品質(zhì)量的檢測調(diào)查結(jié)果顯示，在近八百份乳品采樣中，抗生素殘留超標(biāo)居不合格項(xiàng)目第一位。抗生素殘留的來源及其危害

乳和乳制品中抗生素殘留的來源要追尋到原料生產(chǎn)及其流通過程。首先，使用抗生素防治動物疫病。對患病奶牛用藥不當(dāng)及不遵守停藥期是造成牛奶中抗生素殘留的重要因素。其次，抗生素類飼料添加劑的使用。第三，飼養(yǎng)戶和經(jīng)營商為了保鮮，將抗生素人為添加到畜產(chǎn)品中，來抑制微生物的生長、繁殖，防止牛奶酸敗變質(zhì)，也是造成抗生素殘留超標(biāo)的重要因素。

從乳制品加工的角度來看，原料乳中抗生素殘留物嚴(yán)重干擾發(fā)酵乳制品的生產(chǎn)，抗生素殘留可嚴(yán)重影響干酪、黃油、發(fā)酵乳的起酵和后期風(fēng)味的形成。長期服用含低劑量抗生素殘留的乳制品，日積月累會危害人體健康。主要危害表現(xiàn)在：其一，毒性作用，如長期攝入氨基糖苷類抗生素嚴(yán)重超標(biāo)的乳產(chǎn)品可導(dǎo)致腎毒性和耳毒性。其二，過敏反應(yīng)。其三，病原菌耐藥性增加。其四，破壞人體胃腸道微生物菌群的動態(tài)平衡。其五，妨礙我國畜產(chǎn)品的國際貿(mào)易。抗生素殘留檢測方法的研究進(jìn)展

目前抗生素殘留檢測的方法很多，基本上可以分為四大類型：一是經(jīng)典的微生物檢測方法；二是現(xiàn)代儀器分析方法；三是生化免疫分析法；四是專一試劑盒法。

3.1 經(jīng)典微生物檢測法

其測定原理基于抗生素對微生物的生理機(jī)能、代謝的抑制作檢測用，因而與臨床應(yīng)用的要求一致，但其測定時間長且結(jié)果誤差較大。如TTC法、戴爾沃檢測（Delvotest SP）法、BY法等。

3.1.1 TTC法 

TTC法是國際上較早通用的標(biāo)準(zhǔn)測定法，也是我國鮮奶中抗生素殘留量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)（GB4689.27-94）規(guī)定的檢測法。如果牛奶中含有抗生素，則加入菌種（嗜熱鏈球菌）經(jīng)培育2.5-3h后，加入TTC指示劑（三苯基四氮唑）不發(fā)生還原反應(yīng)，所以樣品呈無色狀態(tài)；如果牛奶中不含抗生素，則樣品呈紅色。TTC法檢測的各種抗生素靈敏度如下：青霉素為0.004單位、鏈霉素0.5單位、慶大霉素0.4單位、卡那霉素5單位。TTC法主要對于青霉素類和氯霉素藥物敏感，但對鏈霉素不太敏感，對新霉素根本不敏感，并且消毒劑可干擾TTC試驗(yàn)。TTC法檢測抗生素殘留雖然費(fèi)用較低，但檢測方法消耗時間也相對較長，因此應(yīng)用受到一定限制。

3.1.2 戴爾沃檢測（Delvotest SP）法

是由荷蘭其試劑是由荷蘭DSM公司生產(chǎn)并由AOAC認(rèn)證。原理是利用微生物——嗜熱芽胞菌在64℃條件下培養(yǎng)2.5～3h后會產(chǎn)酸，酸引起指示劑BCP(溴甲酚紫)變?yōu)辄S色；若牛奶樣品中不含抗生素，培養(yǎng)后樣品呈黃色，如樣品中含有抗生素, 嗜熱芽胞菌生長受到抑制而無法產(chǎn)酸，指示劑將不變色。可檢測到β-內(nèi)酰胺類抗生素在內(nèi)的更多抗生素，如磺胺類、四環(huán)素類等，其中對青霉素和磺胺類抗生素特別靈敏。Delvotest SP 法操作方便，嚴(yán)格實(shí)用，容易判斷，結(jié)果可靠，費(fèi)用適中等優(yōu)點(diǎn)；但也易出現(xiàn)假陽性，此方法適用于農(nóng)場、企業(yè)、實(shí)驗(yàn)室及政府監(jiān)測部門。

3.1.3 BY法

BY法，也稱藍(lán)黃檢測法，是一種廣譜的微生物抑制法，能在較短的時間里檢測到乳制品中抗生素的殘留，通過顏色的對比判斷陽性、陰性和可疑樣品。B?Linage等通過這種方法對β-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類等25種抗生素進(jìn)行了檢測，其殘留的檢測限與歐盟規(guī)定的檢測限很接近。此方法耗時短，操從簡單，檢測抗生素種類較多，但誤差較大，容易誤檢。

3.2 現(xiàn)代儀器分析方法

是利用抗生素分子中的基團(tuán)所具有的特殊反應(yīng)或理化特性，借助現(xiàn)代儀器對抗生素殘留進(jìn)行精確分析的一種方法。如色譜法、熒光法、毛細(xì)管電泳、色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等。

色譜法有氣相色譜（GS）、高效液相色譜（HPLC）法、反相高效液相色譜法等。檢測的過程運(yùn)用了色譜理論，通過高靈敏度的檢測器，分離速度快、效率高和操作自動化。一般要經(jīng)過樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟，能檢測抗生素的具體含量。蔡穎用反相HPLC法測定乳制品中土霉素、四環(huán)素和金霉素殘留量。檢測限為：土霉素為15.0μg/kg、四環(huán)素為20.0μg/kg、金霉素為18.0μg/kg。Jian Wang等運(yùn)用超高效液相色譜和飛行質(zhì)譜聯(lián)用(UPLC/Q-Tof MS)和LC/MS/MS測定牛奶中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的殘留量，其檢測限為：紅霉素40ug/kg，泰樂菌素50ug/kg，替米考星50ug/kg，能滿足各國對這六種β-內(nèi)酰胺類抗生素的最低檢出要求。

儀器分析方法分離速度快、效率高和自動化程度高，能檢測抗生素的具體含量，敏感性較高，結(jié)果準(zhǔn)確，但待檢樣品需經(jīng)一系列的預(yù)處理，繁瑣費(fèi)時，還必須有相應(yīng)的價格昂貴的儀器設(shè)備。一般在大型實(shí)驗(yàn)室使用，適合于精確測定。

3.3 生化免疫法

目前應(yīng)用的生化免疫分析技術(shù)，是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析技術(shù)。其基本原理是抗原抗體的競爭性結(jié)合?？煞譃槊嘎?lián)免疫測定法（ELISA）、熒光免疫測定法(FIA)、免疫分析技術(shù)與常規(guī)理化分析技術(shù)聯(lián)用的方法等。

酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)：以待測抗原（或抗體）與酶標(biāo)抗體（或抗原）的特異結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)，通過酶活力測定來確定抗原（或抗體）含量。因?yàn)榻Y(jié)合了免疫反應(yīng)和酶催化反應(yīng)，所以是一種特異而又敏感的技術(shù)。YONG JIN運(yùn)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)對慶大霉素的檢測限度為0.5 ng/mL。Bucknal等運(yùn)用免疫檢測法測定了在牛奶中幾種喹諾酮藥物的殘留量。酶聯(lián)免疫法測定，其敏感性和特異性好，檢測的靈敏度以普遍使用的β-內(nèi)酰胺類計(jì)：青霉素為5ppb，阿莫西林為10ppb，氨芐西林為10ppb，頭孢西林為8ppb。其檢測結(jié)果快速準(zhǔn)確，9分鐘內(nèi)即可檢測出牛奶中β-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、磺胺類等抗生素的殘留含量，可監(jiān)控牧場用藥的情況。

熒光免疫測定(FIA)法原理是應(yīng)用一對單克隆抗體的夾心法。底物用磷酸-4-甲基傘形酮，檢測產(chǎn)物發(fā)出的熒光，熒光強(qiáng)度與抗原抗體復(fù)合物(Mb)濃度呈正比，可在8min內(nèi)得出結(jié)果。結(jié)果以Mb每小時釋放的速率表示(△Mb)表示。Huth 已經(jīng)用熒光免疫法測定了牛奶中的6種β-內(nèi)酰胺類抗生素，得到它們的最低檢測限為：青霉素G3.2μg/kg、氨芐青霉素2.9μg/kg、羥氨芐青霉素3.6μg/kg、頭孢匹林16.3μg/kg；該法重復(fù)性好，具有快速、敏感、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。

生化免疫法測定抗生素殘留靈敏度極高，達(dá)到ng級水平；檢測快速、專一性強(qiáng)。由于此法的高度專一性，每檢測一種抗生素就要制備或購買相應(yīng)的抗原或抗體，導(dǎo)致檢測費(fèi)用較高。因此生化免疫檢測法不可能取代色譜或光譜等常規(guī)分析方法，只能作為其重要的補(bǔ)充。

 專一試劑盒法

ECLIPSE試劑盒的原理是含有芽孢桿菌的瓊脂培養(yǎng)基和pH指示劑，當(dāng)在(65±1)℃下培養(yǎng)時，孢子發(fā)育生長，降低培養(yǎng)基pH值，在pH指示劑的作用下，藍(lán)(紫)色變?yōu)榫G-黃色。生鮮牛乳中的抗生素殘留使微生物生長和酸的產(chǎn)生受到抑制，由于沒有酸生成，顏色將不會改變。

ECLIPSE試劑盒有ECLIPSE50和ECLIPSE100兩種試劑盒。ECLIPSE50的精確度雖然沒有ECLIPSE100的高，但其檢測限都符合歐盟標(biāo)準(zhǔn)，彌補(bǔ)了快速方法只能單一檢測某類抗生素的缺陷，同時提高了檢測的廣譜性和高靈敏度，同時也可以同歐盟等國家的先進(jìn)檢測技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)接軌我國的牛奶事業(yè)提供非常有效和準(zhǔn)確的抗生素殘留檢測方法。且操作簡單，靈活性強(qiáng)，無需對樣品進(jìn)行任何的處理，只需嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的方法進(jìn)行操作，就能獲得理想的效果，且不易出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象，被檢樣品的需要量少，且費(fèi)用低，越來越被廣泛應(yīng)用。

乳制品抗生素殘留的檢測方法很多，有的操作煩瑣,有的實(shí)驗(yàn)條件要求高，有的檢驗(yàn)時間太長；這些不僅會給乳制品生產(chǎn)企業(yè)造成經(jīng)濟(jì)上和時間上的損失，而且檢測結(jié)果常常會被原輔材料和人為操作等因素所影響。牛奶中抗生素殘留是涉及人類健康的公共衛(wèi)生問題，開發(fā)出越來越準(zhǔn)確、快速，誤差越來越小的檢測方法，方便地檢出乳和乳制品中抗生素殘留，凈化消費(fèi)環(huán)璄，就能為居民的身心健康提供保障，促進(jìn)中國乳業(yè)健康發(fā)展。

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第二篇：食品中抗生素殘留危害及檢測方法

食品中抗生素殘留危害及檢測方法

隨著人們生活質(zhì)量的提高，食品安全問題越來越為廣大消費(fèi)者所關(guān)注，特別是農(nóng)藥和抗生素等藥物殘留問題更是廣大消費(fèi)者所關(guān)注的焦點(diǎn)問題。在食品安全這個全球關(guān)注的熱點(diǎn)問題上，如何快速、準(zhǔn)確地檢測食品安全的問題已成為重中之重。要檢測抗生素在食品中的殘留，必須選擇特異性強(qiáng)、靈敏度高、高效快速的檢測方法。因此，研究各種抗生素類殘留檢測的方法，提高其靈敏度與選擇性具有十分重要的意義。

抗生素具有哪些危害

人們吃了有抗生素殘留的肉、蛋、奶等食物后，會造成抗生素在人體內(nèi)蓄積，使人產(chǎn)生對抗生素的抗性，引起各種組織器官病變，甚至癌變。

對人類健康的危害

對人體腸道菌群的影響

人體腸道菌群是一個平衡的生態(tài)系統(tǒng)，對保持人體健康起著非常重要的作用。如果人們長期攝入含有抗生素的食品后，會使敏感菌群被殺滅或抑制，而耐藥菌群卻大量繁殖，從而打破原來的平衡狀態(tài)造成菌群失調(diào)，這就可能會導(dǎo)致長期腹瀉或營養(yǎng)不良，嚴(yán)重時還可造成耐藥菌感染，給臨床治療帶來困難。

引起過敏和變態(tài)反應(yīng) 青霉素、四環(huán)素、磺胺類及某些氨基糖苷類抗生素能使部分人群發(fā)生過敏反應(yīng)和變態(tài)反應(yīng)，氯霉素可破壞機(jī)體造血功能，誘發(fā)再生障礙性貧血。經(jīng)常食用含抗生素的動物性食品，輕者出現(xiàn)皮膚瘙癢、蕁麻疹、關(guān)節(jié)腫痛，重者導(dǎo)致血管性水腫、休克、甚至死亡。

導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性增加

目前，由于抗生素的廣泛使用，使得細(xì)菌的耐藥性不斷增加，食用含抗生素殘留的動物性食品后，人體內(nèi)細(xì)菌的耐藥性增加。同時，動物體內(nèi)的耐藥性菌株的耐藥性也可能轉(zhuǎn)移到人體細(xì)菌中，從而對人類產(chǎn)生極大的危害。

其他毒害作用

動物性食品中殘留的鏈霉素進(jìn)入人體后可引起腎損害和聽神經(jīng)受損。長期攝入氨基糖苷類抗生素殘留嚴(yán)重超標(biāo)的動物性食品，可損害第8 對腦神經(jīng)，出現(xiàn)頭暈、頭痛、耳鳴、耳聾、惡心、嘔吐等癥狀。四環(huán)素會引起肝損傷，與骨骼或牙齒中的鈣質(zhì)結(jié)合后，使骨骼及牙齒黃染，還可影響兒童的生長發(fā)育。鄰氯青霉素、頭孢菌素等可引起人類免疫性疾??；氯霉素會損害人的造血功能，抑制蛋白質(zhì)

摘要：文章綜述了抗生素殘留的來源與途徑, 介紹了抗生素殘留對人類健康、乳制品生產(chǎn)、環(huán)境及其他方面造成的危害，分析了檢測抗生素殘留的方法，包括微生物檢測法、儀器檢驗(yàn)法、免疫學(xué)分析法等，并指出了這些檢測方法的研究現(xiàn)狀與發(fā)展前景。

對乳制品生產(chǎn)工藝的危害

由于含有抗生素的奶無法制成酸奶、奶酪等一些高質(zhì)量牛奶產(chǎn)品，容易造成大量原料奶的浪費(fèi)，給乳品企業(yè)造成經(jīng)濟(jì)損失。另一方面，一些不法奶戶在高溫季節(jié)為防止鮮乳的酸敗，往往向牛乳中摻雜各種抗生素，從而造成乳中抗生素殘留，對人體也造成了很大的危害。

對環(huán)境的危害

一些性質(zhì)穩(wěn)定的藥物被排泄到環(huán)境中仍能穩(wěn)定存在很長時間，從而造成環(huán)境中的藥物殘留。鏈霉素、土霉素在環(huán)境中不易降解；螺旋霉素低濃度降解很快，但濃度高時需6 個月才能降解完；桿菌肽鋅在有氧的條件下完全降解需3～4個月，在無氧環(huán)境中降解所需要的時間更長。據(jù)報道，動物養(yǎng)殖場污水處理池中紅霉素、復(fù)紅霉素、磺胺甲唑質(zhì)量濃度可達(dá)69g/L，這些藥物的排放污染了環(huán)境，破壞了生態(tài)平衡。

抗生素殘留量的檢測方法

隨著社會的進(jìn)步和人們對抗生素殘留的日益重視，在客觀上就要求改進(jìn)傳統(tǒng)的檢測方法。引進(jìn)先進(jìn)的檢測儀器，尋求一種快速、精確的檢測方法，使得檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠。

微生物檢測方法

微生物檢測方法的主要原理是根據(jù)抗微生物藥對特異微生物的抑制作用，來定性或定量檢測受檢樣品中殘留的抗微生物藥。微生物檢測法應(yīng)用較為廣泛，是抗生素殘留檢測的傳統(tǒng)方法，但測定時間長，結(jié)果誤差較大，操作復(fù)雜。其優(yōu)點(diǎn)是費(fèi)用低，一般實(shí)驗(yàn)室都能操作。

氯化三苯四氮唑法（TTC）

這是目前我國食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中用來檢查牛乳中抗生素殘留的檢測方法。如果牛乳中有抗生素存在，當(dāng)乳中加入菌種（嗜熱鏈球菌）經(jīng)培養(yǎng)后，菌種不增殖。此時，加入的TTC 指示劑不發(fā)生還原反應(yīng)，所以仍呈無色狀態(tài)。如果沒有抗生素存在，則加入菌種就可增殖，TTC 還原變成紅色，使樣品染成紅色。

棉拭法或紙片法

這是檢測胴體內(nèi)可疑抗生素殘留的現(xiàn)場試驗(yàn)方法，簡便而又有一定準(zhǔn)確性，被世界普遍采用，具有廣域的靈敏性。它是用棉拭插入待檢部位浸潤20min取出，放入有枯草桿菌的培養(yǎng)基中培養(yǎng)18h～24 h，或用圓濾紙從腎臟或乳取樣，與含有枯草桿菌等細(xì)菌的營養(yǎng)瓊脂貼合培養(yǎng)，通過觀察棉拭周圍有無抑菌圈或根據(jù)其大小判定有無抗菌物質(zhì)存在。該法的特點(diǎn)是能夠確定抗生素的種類，提高檢出率和準(zhǔn)確率。如，氯霉素最低檢出限量為0.01mg/kg、土霉素為0.05mg/kg等。

杯蝶法

樣品經(jīng)處理后，注入牛津杯中，與含菌液的檢定平板貼合。培養(yǎng)后，根據(jù)抑菌圈的有無及大小判定結(jié)果。采用不同的試驗(yàn)菌種，可檢測不同的抗生素。如檢測肉中四環(huán)素類抗生素用蠟樣芽孢桿菌；檢測青霉素用金黃色葡萄球菌；檢測鏈霉素或雙氫鏈霉素用枯草桿菌。

電泳生物檢測法

該法靈敏度較高。Fusac（1989）應(yīng)用電泳和微生物自顯影技術(shù)測定動物組織中殘留的氨基糖苷類抗生素（如，雙氫鏈霉素、卡那霉素等），取得了滿意的結(jié)果。

瓊脂擴(kuò)散法

Korkela 以豬腎為樣品采用瓊脂擴(kuò)散法對幾種抗生素殘留檢測進(jìn)行了比較。能檢測出土霉素和鏈霉素的殘留。Untermann（1986）報道，采用枯草桿菌進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散法檢測出了牛、豬及山羊的肌肉中和腎臟內(nèi)抗生素的殘留。

儀器檢驗(yàn)方法

儀器檢驗(yàn)方法是利用抗生素分子中的基團(tuán)所具有的特殊反應(yīng)或性質(zhì)來測定其含量，進(jìn)行定性定量

和藥劑鑒定。其敏感性較高，但有的檢測程序較復(fù)雜或檢測費(fèi)用較高。

液相色譜法（LC）

德國Russel 報道了液相色譜法檢測氯霉素殘留，檢測限為10μg/kg，回收率為63%～79%。Jefery等（1994）報道了用LC法測定沙拉沙星在海峽鲇魚肌肉中的殘留，沙拉沙星的檢測限為1.4ng/g，回收率為85.4％～104％。

氣相色譜法（GC）

該法有許多高靈敏、通用性或?qū)Ｒ恍詮?qiáng)的檢測器供選用。Plomp和Maes報道了在血液和羊水中甲砜霉素的快速氣相色譜檢測方法，檢測限為0.1μg/mL，甲砜霉素血清的回收率為91.3％，羊水的回收率為90.3％。

薄層色譜法（TLC）

該法經(jīng)常作為樣品篩選方法。其優(yōu)點(diǎn)是速度快，有利于現(xiàn)場應(yīng)用，且已在飼料、組織和體液等的分析中得到了廣泛的應(yīng)用。Bossuyt 等（1976）報道用TLC 法測定牛奶中新霉素的殘留。但新霉素的檢測限為15μg/g，遠(yuǎn)高于牛奶中的新霉素殘留限量。

高效薄層色譜法（HPTLC）

該法現(xiàn)已成為僅次于HPLC的殘留分析法。HPTLC在獸藥殘留的快速篩選檢測方面應(yīng)用廣泛。測定組織樣品時需在樣品展開后噴以硫酸-高氯酸試液，靈敏度可提高10倍，檢測限達(dá)10μg/kg。

高效液相色譜法（HPLC）

這是目前廣泛應(yīng)用的一種理化檢測方法。該法對抗生素殘留的檢測具有較高的靈敏性。Anadan等（1995）報道了用HPLC法測定雞脂肪、肝臟、腎臟、肺臟及皮膚中恩諾沙星及代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星濃度，檢測限為0.003 μg/g，在各種組織中提取回收率均大于70％。Rolinski 等（1997）用HPLC 法檢測了肉雞組織和雞蛋中諾氟沙星殘留，檢測限為0.0025μg/g。

超臨界流體色譜法（SFC）

該法可彌補(bǔ)GC和HPLC法的不足，但不可能取代二者。SFC 最大優(yōu)點(diǎn)是可以方便地連接各種靈敏的檢測器。Pensabene 等將雞蛋樣品進(jìn)行超臨界流體萃取后進(jìn)行磺胺類藥物的殘留分析，檢測限為25 μg/kg，回收率為81％~101%。

毛細(xì)管電泳法（CE）Ackermans 等將豬肉樣品加乙腈提取，離心后上清液過濾膜后直接進(jìn)行毛細(xì)管區(qū)帶電泳分析。測出肉樣中15 種磺胺類藥物的檢測限在2 mg/kg~9mg/kg 的范圍內(nèi)。

聯(lián)用技術(shù)

聯(lián)用技術(shù)可揚(yáng)長避短，一般兼分離、定量和定性（分子結(jié)構(gòu)信息）于一體，因而特別適用于確證性分析。常見的聯(lián)用技術(shù)有薄層色譜-質(zhì)譜（TLC-MS）、氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）、液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）等。色譜和質(zhì)譜聯(lián)用由于實(shí)現(xiàn)了高效層析分離和檢測聯(lián)機(jī)，可用微電腦控制層析條件、程序和數(shù)據(jù)處理，其特異性、靈敏度和重復(fù)性均好，并可一次同時完成同一樣本中多種藥物及其代謝物的檢測。

免疫分析法

免疫分析法主要有放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）、熒光免疫分析（FIA）和酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。與常規(guī)的理化分析技術(shù)相比，免疫分析技術(shù)最突出的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、容量大、速度快、儀器化程度低且分析成本低，分析效率則為HPLC 或GC 的幾十倍以上。免疫分析法能與其他技術(shù)聯(lián)用。

放射免疫分析（RIA）

Mahon 等曾將卡那霉素與人血清白蛋白直接連接制備結(jié)合抗原，并建立了血清樣品的放射免疫測定法，檢測限為10 ng/mL。1984 年Arnold 等即建立了氯霉素的放射免疫測定法，其檢測限為0.21μg/kg。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

Prithipal Singh 等（1989）建立了檢測豬血中磺胺二甲嘧啶的ELISA 方法，其檢測范圍為10ng/mL~1 000 ng/mL。國內(nèi)劉智宏等（1998）建立了檢測血清中磺胺二甲基嘧啶的ELISA 方法，其檢測限為50 ng/mL。楊紅（1999）建立了測定牛奶、豬血漿等樣本的ELISA 檢測方法，其檢測限約0.025 ng/mL。

第三篇：食品中農(nóng)藥殘留的快速檢測

食品中農(nóng)藥殘留的快速檢測

一、前言

隨著人們環(huán)境意識的不斷加強(qiáng)，由農(nóng)藥引起的食品安全問題也越來越受到人們的關(guān)注。為了保障消費(fèi)者的安全和健康，提高農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全水平，增強(qiáng)農(nóng)業(yè)產(chǎn)品的國際競爭力，我國政府決定加強(qiáng)農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的監(jiān)控，建立健全農(nóng)藥殘留的檢測體系，實(shí)施對蔬菜、瓜果、茶葉生產(chǎn)全過程的農(nóng)藥監(jiān)控，從源頭抓起，加強(qiáng)農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)地檢測，把住農(nóng)產(chǎn)品的市場準(zhǔn)入關(guān)。

（一）農(nóng)藥概念

農(nóng)藥(pesticides)是指農(nóng)藥是指用于預(yù)防、消滅或者控制危害農(nóng)業(yè)、林業(yè)的病、蟲、草及其他有害生物，以及有目的地調(diào)節(jié)植物、昆蟲生長的藥物的通稱。

現(xiàn)在農(nóng)藥不僅應(yīng)用于農(nóng)業(yè)，而且也廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)、林業(yè)和公共衛(wèi)生事業(yè)等方面。

農(nóng)藥殘留是指農(nóng)藥使用后殘存于生物體、食品(農(nóng)副產(chǎn)品)和環(huán)境中的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱。

1.按化學(xué)成分可分為有機(jī)氯、有機(jī)磷、氨基甲酸酯類、擬除蟲菊酯類及砷、汞、銅、硫磺等制劑。

2.按用途可分為殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物生長調(diào)節(jié)劑和糧食熏蒸劑等。

農(nóng)藥除了可造成人體的急性中毒外，絕大多數(shù)對人體產(chǎn)生的慢性危害，多是通過污染食品的形式造成。

某些農(nóng)藥對人和動物的遺傳和生殖造成影響，產(chǎn)生畸形和引 起癌癥等方面的毒素作用。

1、有機(jī)氯農(nóng)藥

容易在人體內(nèi)蓄積

慢性毒性作用，主要表現(xiàn)在侵害肝、腎及神經(jīng)系統(tǒng)，動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)有致畸、致癌作用

我國1983年停止生產(chǎn)，1984年停止使用這類農(nóng)藥

2、有機(jī)磷農(nóng)藥

早期的高效高毒品種：對硫磷（1605）、甲拌磷（3911）、內(nèi)吸磷（1059）

后期使用得較多的為高效低毒低殘留的品種，如：樂果、敵百蟲、殺螟松、倍硫磷

毒性極低的馬拉硫磷、雙硫磷、氯硫磷、鋅硫磷、碘硫磷、地亞農(nóng)、滅蜈松

急性毒性：有機(jī)磷農(nóng)藥化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，分解快，在作物中殘留時間短。

抑制血液和組織中膽堿酯酶的活性，引起乙酰膽堿在體內(nèi)大量積聚而出現(xiàn)一系列神經(jīng)中毒癥狀，如神經(jīng)功能紊亂、出汗、震顫，精神錯亂、語言失

主要表現(xiàn)為植物性食物殘留，尤其是含有芳香物質(zhì)的植物

如：水果、蔬菜，特別是葉菜類如小白菜、大白菜、雞毛菜、甘藍(lán)、芹菜、韭菜、芥菜、花菜、綠花菜、茼蒿、枸杞菜和黃瓜等

酶抑制法酶抑制技術(shù)是研究比較成熟、應(yīng)用最廣泛快速的農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)，是根據(jù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶（AChE)的特異性生化反應(yīng)建立起來的農(nóng)藥殘留的微量和痕量快速檢測技術(shù)。

2、速測儀

原理:在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。酶催化乙酰膽堿水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)。

用分光光度計(jì)在412nm處測定吸光度隨時間的變化，計(jì)算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。

免疫分析技術(shù)是將免疫反應(yīng)與現(xiàn)代測試手段相結(jié)合而建立的超微量分析技術(shù)，是基于抗原抗體特異性結(jié)合和反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析方法。目前應(yīng)用于農(nóng)殘檢測的是酶免疫分析(EIA)和放射性免疫分析(RIA)。其中酶聯(lián)免疫分析技術(shù)應(yīng)用最為普遍。

3、酶聯(lián)免疫技術(shù)

ELISA是一種以酶作為標(biāo)記物的免疫分析方法，也是目前應(yīng)用最廣泛的免疫分析方法之一，它將酶標(biāo)記在抗體／抗原分子上形成酶標(biāo)抗體／酶標(biāo)抗原，酶作用于能呈現(xiàn)出顏色的底物，通過儀器或肉眼進(jìn)行辨別。

ELISA法基本原理是預(yù)先結(jié)合在固相載體上的抗體或抗原分子與樣品中的抗原或抗體分子在一定條件下進(jìn)行免疫學(xué)反應(yīng)。

該法因不需昂貴儀器設(shè)備，對人體無害等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛采用，具有靈敏、特異、快速、穩(wěn)定以及易于自動化操作等特點(diǎn)。

4、發(fā)光菌檢測法

農(nóng)藥與細(xì)菌作用后可影響細(xì)菌的發(fā)光程度，通過細(xì)菌發(fā)光情況，可測出農(nóng)藥殘留量。

此方法簡便但是特異性差

5敏感家蠅對殺蟲劑具有敏感性，記錄家蠅存活情況，根據(jù)家蠅的死亡率可知農(nóng)藥殘留情況。

該技術(shù)方法直接、過程簡單、容易掌握，但定性粗糙，只對少數(shù)農(nóng)藥有效，而且由于其他生物對不同農(nóng)藥的毒性反應(yīng)與人畜可能不同，因此影響對農(nóng)藥殘留量的判斷。如家蠅對毒性較低的除蟲菊酯類敏感，遠(yuǎn)超過有機(jī)磷和氨基甲酸酯類中毒或高毒的農(nóng)藥。

三、農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)展望

一些快速速檢測方法與國家標(biāo)準(zhǔn)方法和儀器法相比具有操作簡單、快速的優(yōu)點(diǎn)，但由于大多數(shù)快速檢測方法在食品樣品前處理、操作規(guī)范性方面還有許多待完善之處，目前還只能作為快速篩選的手段而不能作為最終診斷的依據(jù)，兼具快速和準(zhǔn)確兩大優(yōu)點(diǎn)是快速檢測方法追求的目標(biāo)。

目前的食品現(xiàn)場快速檢測主要呈現(xiàn)4大趨勢：由于高新技術(shù)的應(yīng)用，檢測能力不斷提高，檢測靈敏度越來越高，殘留物的超痕量分析水平已達(dá)到了10-7g檢測速度不斷加快，智能化芯片和高速電子器件與檢測器的使用，使食品安全檢測周期大大縮短選擇性不斷提高，高效分離分段、各種化學(xué)和生物選擇性傳感器的使用，使在復(fù)雜混合體中直接進(jìn)行污染物選擇性測定成為可能； 4 由于微電子技術(shù)、生物傳感器、智能制造技術(shù)應(yīng)用，檢測儀器向小型化、便攜化方向發(fā)展，使實(shí)時、現(xiàn)場、動態(tài)、快速檢測正在成為現(xiàn)實(shí)。針對我國的特殊國情，目前我國基層單位很多速測技術(shù)的應(yīng)用還只處于定性或半定量水平，易用型的小型化儀器的應(yīng)用是目前和今后快速檢測技術(shù)的發(fā)展趨勢。

第四篇：乳品中抗生素的檢測方法

上海千測標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司

乳品中抗生素的檢測方法

乳品中抗生素的檢測方法經(jīng)多年的實(shí)踐，人們認(rèn)識到抗生素可以增強(qiáng)牲畜抗病能力、提高養(yǎng)殖業(yè)產(chǎn)投比。但過量使用，將降低畜牧產(chǎn)品品質(zhì)，影響乳品發(fā)酵。而含有抗生素殘留的動物性產(chǎn)品，進(jìn)入人類食物鏈，會使體內(nèi)菌株產(chǎn)生抗生素抗性，擾亂機(jī)體內(nèi)環(huán)境平衡，菌群失調(diào)而不利于健康；也會對易感人群產(chǎn)生過敏反應(yīng)、激素障礙變態(tài)反應(yīng)。因此，F(xiàn)AO及WHO早在1969年就提出應(yīng)規(guī)定各種動物性食品中的抗生素殘留允許標(biāo)準(zhǔn)，WHO于1979年規(guī)定原料奶及消毒牛奶中不得有抗生素。近年來，國內(nèi)對奶制品中的抗生素殘留也非常關(guān)注，無抗奶（Antibiotic-FreeMilk）的生產(chǎn)和消費(fèi)已成為大勢所趨。但我們對奶制品中抗生素的檢測缺乏必要的研究，檢測技術(shù)還十分落后。本文旨在對抗生素的檢測方法進(jìn)行總結(jié)，為在我國開展相關(guān)工作奠定基礎(chǔ)。我國關(guān)于奶制品中抗生素檢測的國家標(biāo)準(zhǔn)方法最早出現(xiàn)在《牛乳檢驗(yàn)方法——GB5409—85》中，采用TTC法。1994年制訂的《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)？鮮乳中抗生素殘留量檢驗(yàn)——GB/T？4789.27—1994》，也采用TTC法。2001年9月，農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《無公害食品生鮮牛乳》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中，檢測方法同《GB5409—85》，并不得檢出。《綠色食品消毒牛乳標(biāo)準(zhǔn)》也做了類似規(guī)定?？煽闯?，我國還未將抗生素納入常規(guī)檢測，作為必檢項(xiàng)目；所采用的TTC法精確性和時效性都比較差。

展望新世紀(jì)的乳制品工業(yè)，為了保障人體健康，適應(yīng)WTO的要求，增強(qiáng)國內(nèi)乳制品業(yè)的國際競爭力，必須將抗生素的檢測納入議事日程。

首先是要制定相應(yīng)的法規(guī)和檢測程序，將乳制品中抗生素的檢測、報告、處罰和管理等納入法制化軌道，適應(yīng)市場經(jīng)濟(jì)就是法制經(jīng)濟(jì)的要求。

其次是要修訂、制訂乳制品標(biāo)準(zhǔn)，將抗生素的檢測納入國標(biāo)體系。解決國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)混亂，與國際標(biāo)準(zhǔn)沖突的問題，加大采用國際標(biāo)準(zhǔn)的比例，同國際標(biāo)準(zhǔn)接軌。

再次是要進(jìn)行抗生素檢測方法篩選工作，提高國產(chǎn)試劑盒的研制能力。努力研究發(fā)展一些簡單、快速、經(jīng)濟(jì)和便攜化的能檢測多種抗生素殘留的分析技術(shù)；發(fā)展高效、高靈敏的聯(lián)用技術(shù)和多殘留組分確證技術(shù)。