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醫(yī)學(xué)碩士研究生開題報告的寫法

一、立題依據(jù)(科學(xué)意義及國內(nèi)外現(xiàn)狀分析及參考文獻(xiàn))　　惡性黑色素瘤是一種高度惡性且侵襲性的癌之一，多發(fā)生于皮膚，早期發(fā)生血行轉(zhuǎn)移。對放、化療不敏感，在世界范圍內(nèi)發(fā)病率增高，人們一直在期待著可以征服惡性黑素瘤的新的療法的出現(xiàn)!　　最近大量的數(shù)據(jù)表明惡性腫瘤的發(fā)展與T-鈣粘蛋白的表達(dá)變化相關(guān).T-鈣粘蛋白已在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌[1-3] 、胃癌、胰腺癌、卵巢癌[4-9]等多種惡性腫瘤中被檢測到表達(dá)減少.最近的研究表明T/H―鈣粘蛋白在乳腺癌中的重新表達(dá)能抑制腫瘤細(xì)胞的生長,降低體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的侵襲潛能[1].T/H―鈣粘蛋白這個新型鈣粘蛋白分子在人類許多癌細(xì)胞中表達(dá)都降低表明它或許在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[10]及維持正常細(xì)胞的表型中起重要作用[11].　　T/H―鈣粘蛋白與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的聯(lián)系,也許它會為腫瘤的診斷和治療帶來新的契機(jī).　　T-鈣粘蛋白是否對惡性黑色素瘤也有作用，目前還沒有相關(guān)研究的報道，所以本實驗將進(jìn)行相關(guān)方面的探討性研究!　　二、研究內(nèi)容及預(yù)期成果(說明具體研究內(nèi)容、創(chuàng)新點及擬解決的關(guān)鍵問題、預(yù)期成果及提供形式)　　研究內(nèi)容：　　第一部分：正常表皮組織、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中T-cadherin表達(dá)情況　　第二部分 T-cadherin基因克隆和真核表達(dá)載體的構(gòu)建　　第三部分：T-cadherin基因的真核表達(dá)及生物活性分析　　創(chuàng)新點：首次將T-cadherin基因轉(zhuǎn)染黑素瘤細(xì)胞　　擬解決的關(guān)鍵問題：通過RT-PCR反應(yīng)擴(kuò)增出T-cadherin的基因全長?！　☆A(yù)期成果及提供形式：　　觀察T-鈣粘蛋白在正常皮膚組織細(xì)胞、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況!　　進(jìn)一步闡明T-鈣粘蛋白作用機(jī)制　　T-鈣粘蛋白基因轉(zhuǎn)染入黑色素瘤細(xì)胞后觀察對其增殖和轉(zhuǎn)移活性的抑制情況，探索臨床診斷和治療黑色素瘤及其它腫瘤的方法!　　三、研究方案(包括研究方法、技術(shù)路線、研究進(jìn)度安排)　　研究方法：　　第一部分：正常表皮組織、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中T-cadherin表達(dá)情況　　免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)　　1.材料：從正常人皮膚切取的痣組織，人黑色素瘤細(xì)胞株　　2.主要試劑和溶液　　(1)第一抗體：兔抗人T-cadherin 抗體　　(2)第二抗體：生物素標(biāo)記羊抗兔IgG　　(3) “三抗” ：鏈親和霉素標(biāo)記HRP　　3.設(shè)備　　4.方法　　(1)冷凍切片的免疫染色程序　　(2)活細(xì)胞的免疫染色程序　　5.熒光顯微鏡檢　　注意：為保證結(jié)果的可靠性應(yīng)該同時設(shè)有對照　　陽性對照(正常組織) ;　　陰性對照(PBS代替一抗)以證明抗體的特異性。　　第二部分 T-cadherin基因克隆和真核表達(dá)載體的構(gòu)建　　1.材料：　　(1)組織和細(xì)胞　　(2)菌株與質(zhì)?！　?3)工具酶　　(4)試劑　　(5)儀器　　2.方法　　(1)引物的設(shè)計　　(2)總RNA的提?。寒惲蚯杷犭?酚-氯仿抽提一步法　　(3)甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳分析其質(zhì)量，觀察所提RNA有無明顯降解;　　(4)逆轉(zhuǎn)錄RT反應(yīng) ：為了證實RT反應(yīng)的成功設(shè)管家基因GAPDH為內(nèi)對照　　(5)PCR擴(kuò)增 ：利用上下游引物，在DNA聚合酶下對目的片段進(jìn)行擴(kuò)增，PCR過程設(shè)β-actin為內(nèi)對照　　(6)PCR產(chǎn)物的回收、純化　　(7)PCR產(chǎn)物的克隆　　(8)DNA序列測定　　(9)真核重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建　　(10)陽性重組質(zhì)粒的鑒定和篩選　　(11)質(zhì)粒的大量提取　　(12)轉(zhuǎn)染黑色素瘤細(xì)胞　　第三部分：T-鈣粘蛋白基因的真核表達(dá)及生物活性分析　　1.材料　　2.方法　　(1)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)　　(2) Western印跡法檢測轉(zhuǎn)染后蛋白的表達(dá)　　(3)流式細(xì)胞周期分析　　(4)凋亡的檢測　　技術(shù)路線圖：　　研究進(jìn)度安排：　　2004.9――2005.7 學(xué)習(xí)學(xué)位課程，查閱文獻(xiàn)，完成課題設(shè)計　　2005.9――2006.9 基本完成實驗研究工作　　2006.10――2007.3 完成實驗補(bǔ)遺工作并 進(jìn)行統(tǒng)計分析，撰寫論文　　2007.4――2007.6 論文答辯　　四、經(jīng)費預(yù)算　　試劑費用： 15000 元　　BR>組織及細(xì)胞： 1000 元　　文獻(xiàn)資料費： 500 元　　論文打印費： 1000 元　　答辯費： 1500 元　　總計： 19000元　　五、課題可行性分析　　實驗在導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行，導(dǎo)師段昕所教授、主任醫(yī)師對黑色素瘤的診斷治療、檢測方法和研究進(jìn)展有深入的了解，對本課題的研究設(shè)計及實驗有重要的指導(dǎo)意義?！　∫淹瓿珊谏亓黾癟-鈣粘蛋白研究最新進(jìn)展的文獻(xiàn)檢索和綜述報告工作?！　∷袑嶒灳诔械箩t(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院皮膚病研究室和中心實驗室完成。實驗室的老師實驗技術(shù)熟練，在細(xì)胞培養(yǎng)、免疫組化及分子生物學(xué)等方面都可給予指導(dǎo);實驗所需的科研儀器設(shè)備實驗室均具備?！　⒖嘉墨I(xiàn):　　1. Toyooka,KO.,Toyooka S.,Virmani AK.,Sathyanarayana UG et al Cancer Res 2001 Jun 1;61(11):4556―60　　2. Lee,S.W.,1996 Nat.Med,2:776―782　　3. Zhong ,Y.,Y.Delgado.,J.Gomez,S.W.Lee et al 2001 Clin Cancer Res.　　4. Takeuchi,M.,Misaki,A.,Chen,B.K.,et al (1999)Histopathology,35,87―8　　5. Kawakami,M.,Staub,J.,Cliby,W.,et al 1999Int.J.Oncol.,15,715―720　　6. Sato,M.,Mori,Y.,Sakurada,A.,et al(1998)Hum.Genet.,43,285―286　　7. Sato,M.,Mori,Y.,Sakurada,A.,et al (1998)Hum.Genet.,103,96―101　　8. Mori,Y.,Matsunaga,M.,Abe,T.,et al (1999)Br J.Cancer,80,556―562　　9. Lee.S.W(1996)Nat.Med.,2,776―782　　10. Hung.Z.Y.,Wu,Y.,Hedric,N&Gutmann,D.H(2003)Mol Cell.Biol 23,566-578　　11. Lee SW.,Reimercl.,Campbell DB.,et al 1998Jun;19(6):1157-9